丙二醛(MDA)含量检测试剂盒

品牌：Solarbio | 货号：BC0025

测定意义：氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA。通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。

测定原理：MDA与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在532nm有最大吸收峰，进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量；同时测定600nm下的吸光度，利用532nm与600nm下的吸光度的差值计算MDA的含量。

需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研 钵、冰和蒸馏水。 

产品内容：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×2 瓶，4℃保存；

MDA 检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二中加入 15mL 试剂一，溶解混匀，4℃保存待用。

试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；

注意事项：MDA 检测工作液较难溶解，可以 70℃加热，并剧烈振荡以促进溶解。或者通过超声处 理以促进溶解。

产品说明： 氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物， 其中包括丙二醛 MDA。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。 丙二醛（MDA）在酸性和高温条件下，可以与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生 成棕红色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑-2，4-二酮），其最大吸收波长在 532nm。进行比色后可估测 样品中过氧化脂质的含量。但是测定植物组织中 MDA 时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶 性糖，糖与 TBA 显色反应产物的最大吸收波长在 450nm，但 532nm 处也有吸收。所以同时测定 600nm、 532nm、450nm 下的吸光度，利用 532nm 与 450nm、600nm 下的吸光度的差值计算 MDA 的含量。 由于植物中受蔗糖干扰较大，动物中受葡萄糖干扰较大，所以本试剂盒有针对蔗糖和葡萄糖的 两个公式。若所测样品为油脂类物质，则两个公式均可。 

操作步骤：

一、MDA 提取：

1、细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 400 万细菌或细 胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃ 离心 10min，取上清，置冰上待测。

2. 组织样品的制备：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取 上清，置冰上待测。

3. 血清（浆）：直接检测。

二、测定步骤：

1、可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，蒸馏水调零。

2、按下表步骤加样： 

混合液在 100℃水浴中保温 60min 后（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，常温， 离心 10min。吸取 200µL 上清液于微量玻璃比色皿或 96 孔板中，测定各样品在 450nm、532nm 和 600nm 处的吸光度。分别计算∆A450=A450 测定-A450 空白，∆A532=A532 测定-A532 空白，∆A600=A600 测 定-A600 空白。空白管只需做 1-2 次。

三、MDA 含量计算：

a.按 96 孔板计算

1、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算

（1）按照蛋白浓度计算 MDA 含量（nmol/mg prot）=(12.9×(∆A532-∆A600)-2.58×∆A450)×V 总÷(Cpr×V 样本) =5×(12.9×(∆A532-∆A600)-2.58×∆A450)÷Cpr

（2）按照样品质量计算 MDA 含量（nmol/g 鲜重）=(12.9×(∆A532-∆A600)-2.58×∆A450)×V 总÷(W×V 样本÷V 提取) =5×(12.9×(∆A532 -∆A600)-2.58×∆A450)÷W

  (3) 按照细菌或细胞密度计算： MDA 含量（nmol/104 cell）=(12.9×(∆A532-∆A600)-2.58×∆A450)×V 总÷(400÷V 提取×V 样本) =0.125×(12.9×(∆A532-∆A600)-2.58×∆A450)

（4）按血清（浆）体积计算： MDA 含量（nmol/mL）=(12.9×(∆A532-∆A600)-2.58×∆A450)×V 总÷V 样本 =5×(12.9×(∆A532 -∆A600)-2.58×∆A450)

V 总：反应体系总体积，0.5mL；V 样品：加入样品体积，0.1 mL；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。 W：样品质量，

g；400：细胞或细菌总数，400 万；V 提取：提取液体积，1mL。

2、植物组织中 MDA 含量计算

（1）按照样品质量计算 MDA 含量（nmol/g 鲜重）=(12.9×(∆A532-∆A600)-1.12×∆A450)×V 总÷(W×V 样本÷V 提取) =5×(12.9×(∆A532-∆A600)-1.12×∆A450)÷W

（2）按照蛋白浓度计算 MDA 含量（nmol/mg prot）=(12.9×(∆A532-∆A600)-1.12×∆A450)×V 总÷(Cpr×V 样本) =5×(12.9×(∆A532-∆A600)-1.12×∆A450)÷Cpr

V 总：反应体系总体积，0.5mL；V 样品：加入样品体积，0.1 mL；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；V 提取：提取液体积，1mL。

b.按微量比色皿计算

1、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算

（1）按照蛋白浓度计算 MDA 含量（nmol/mg prot）=(6.45 ×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)×V 总÷(Cpr×V 样本) =5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)÷Cpr

（2）按照样品质量计算 MDA 含量（nmol/g 鲜重）=(6.45 ×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)×V 总÷(W×V 样本÷V 提取) =5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)÷W

  (3) 按照细菌或细胞密度计算： MDA 含量（nmol/104 cell）=(6.45 ×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)×V 总÷(400×V 样本÷V 提取) =0.0125×(6.45 ×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)

（4）按血清（浆）体积计算： MDA 含量（nmol/mL）=(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)×V 总÷V 样本 =5×(6.45×(∆A532 -∆A600)-1.29×∆A450)

V 总：反应体系总体积，0.5mL；V 样品：加入样品体积，0.1 mL；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样品质量，

g；400：细胞或细菌总数，400 万；V 提取：提取液体积，1mL。

2、植物组织中 MDA 含量计算

（1）按照样品质量计算 MDA 含量（nmol/g 鲜重）=(6.45 ×(∆A532-∆A600)-0.56×∆A450)×V 总÷(W×V 样本÷V 提取) =5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)-0.56×∆A450)÷W

（2）按照蛋白浓度计算 MDA 含量（nmol/mg prot）=(6.45 ×(∆A532-∆A600)-0.56×∆A450)×V 总÷(Cpr×V 样本) =5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)-0.56×∆A450)÷Cpr

V 总：反应体系总体积，0.5mL；V 样品：加入样品体积，0.1 mL；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样品质量，g；V 提取：提取液体积，1mL。

注意事项： 若发现检测样本吸光值过低，可以将沸水浴时间 60min 调整为 90min 或者更长，但同一实验中 的 MDA 的检测都需要延长到同一时间以免引起误差。