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RAPA3G DNA聚合酶为第三代DNA聚合酶,该酶对dUTP具有极强的识别能力,在配合热敏UDG(该酶在95℃热变性5min后不可逆失活,不影响后续PCR反应)的条件下能达到最佳的防污染能力。RAPA3G Probe qPCR MasterMix(with UDG)是将化学修饰的热启动RAPA3G DNA聚合酶、反应Buffer、dNTP、UDG等试剂组成的预混试剂,该制品中的dTTP核酸碱基完全被dUTP所取代,因此扩增产物均包含dUTP,在105 copies污染物的测试条件下,Ct可推迟15个以上(污染去除>99.997%),因此该RAPA3G Probe qPCR MasterMix具有极好的防核酸气溶胶污染性能。 RAPA3G Probe qPCR MasterMix(with UDG)是一种2×浓度的单组分预混试剂,用于探针法定量PCR。该制品不含有ROX校正染料,适用于各种荧光标记探针,并且适用于各种定量PCR机型。此外,该制品在多重定量PCR (MultiPlex qPCR)检测表现出色,至少可进行4重的定量PCR检测。制品中的该酶经化学法修饰,在50℃以下100%无活性,只有95度条件下加热5min后才能完全恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制非特异性PCR扩增,极大的提高了PCR扩增特异性。 |
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组分 |
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主要特征 |
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应用 |
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基因分型、RNA转录的cDNA、基因组DNA、病毒DNA等定量检测。 | |||||||||||||||
储存 |
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请避光置于-20℃可保存3年。请避光置于-20℃以下可保存3年。该试剂经30次冻融后性能无下降,因此不使用时请置于-20℃避光保存。 | |||||||||||||||
反应实例 |
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Fig1.首先使用含dUTP的RAPA3G Probe qPCR MasterMix扩增三种基因产物(GAPDH,EHP,Covid-19 N Gene),然后以105拷贝的含U产物作为模板,分别用RAPA3G Probe qPCR MasterMix(with UDG)和RAPA3G Probe qPCR MasterMix进行扩增,反应结束后统计两组之间的△Ct,结果为:这三个基因的△Ct值分别为15.3、17.1、16.2;△Ct值越大说明去除残留产物的效率越高,表明该RAPA3G Probe qPCR MasterMix(with UDG)具有良好的去除残留模板的能力。 | |||||||||||||||
A | |||||||||||||||
B | |||||||||||||||
C | |||||||||||||||
D | |||||||||||||||
E | |||||||||||||||
Fig2.四重引物、探针检测。分别以nCoV S基因质粒(蓝线- FAM通道)、nCoV N基因质粒(绿线- VIC通道)、nCoV ORF1ab基因质粒(红线- Cy5通道)和 人GAPDH内参Hela cDNA(黄线- ROX通道)为模板,四对引物和四条探针在同一体系内进行检测, 模板均使用10e8-100copy/Test(7个数量级),A为四重检测扩增曲线和标准曲线,C-E为单独每一个通道的性能展示,结果可见该RAPA3G Probe qPCR Mix在7个数量级的动态检测中表现出卓越的扩增性能,各个通道之间区分良好。 |
RAPA3G Probe qPCR MasterMix (with UDG)说明书
作者:上海信裕生物科技有限公司 2021-05-18T00:00 (访问量:1172)
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