多酚氧化酶(PPO)测试盒
品牌:Solarbio | 货号:BC0190
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BC0190-50管/24样 |
Solarbio |
50管/24样 |
760.00元 |
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产品介绍
测定意义:PPO(EC1.10.3.1)主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
测定原理:PPO能够催化邻苯二酚产生醌,后者在525nm有特征光吸收。
需要的仪器,耗材:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
产品内容:
提取液:液体,60ml×1 瓶,4℃保存,用前混匀;
试剂一:液体,40ml×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体,10ml×1 瓶,4℃保存;
操作步骤:
一、 粗酶液提取 :
1. 收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 200 万细菌或细胞加入 400μl 提取液,超
声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次) ;8000g 4℃离心 10 分钟,
取上清,置冰上待测。
2. 称取约 0.2g 组织,加入 1ml 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待
测。
二、 测定操作表:
冷却后,5000g,常温离心 10min,收集上清,用蒸馏水调零,410nm 处检测测定管和对照管吸
光度。
注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进
行 1min 沸水浴处理
PPO 活 性 计算:
1、组织中 PPO 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每分钟每 mg 组织蛋白在每 ml 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶
活力单位。
PPO (U/mg prot) = V 反总×V 样总÷V 样÷T÷0.01× (A 测定-A 对照) ÷Cpr=60× (A 测定-A 对照) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每分钟每 g 组织蛋白在每 ml 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶活
力单位。
PPO(U/g 鲜重)= V 反总×V 样总÷V 样÷T÷0.01×(A 测定-A 对照)÷W=60×(A 测定-A 对照)÷W
2、细菌或培养细胞中 PPO 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每分钟每 mg 组织蛋白在每 ml 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶
活力单位。
PPO (U/mg prot) = V 反总×V 样总÷V 样÷T÷0.01× (A 测定-A 对照) ÷Cpr=60× (A 测定-A 对照) ÷Cpr
(2)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每分钟每 1 万个细菌或细胞在每 ml 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一
个酶活力单位。
PPO(U/10 4 cell)= V 反总×V 样总÷V 样÷T÷0.01×(A 测定-A 对照)÷细菌或细胞密度(10 4 /mL)
=60× (A 测定-A 对照) ÷细菌或细胞密度 (10 4 /mL) =60× (A 测定-A 对照) ÷细菌或细胞密度 (10 4 /mL)
V 反总:反应体系总体积,0.9mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.15 mL;V 样总:加入提取
液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,0.2g.
注意事项:不同样本的多酚氧化酶最佳的反应温度略有差别,可在 25-37℃之间进行调节。
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