1.产气测定
在接种B88、B237菌株的试管内,2d后培养基开始变蓝,并有少量气体产生,滞留在小试管中;3d后培养基由绿色变为蓝色,小试管内的气体明显增多;接种3~4d后,产气的速度最快,气体量最多,以后几天则看不出气体量的增加。接种其他菌株的试管内,培养基颜色由上向下逐渐变蓝 ,但不产气。
利用Giltay培养基法筛选菌株,试管中的培养基由于反硝化细菌**还原酶的作用,**盐还原为亚**盐,使培养基呈碱性,培养基颜色由绿色变为蓝色。反硝化作用较强的菌株通过亚**还原酶的作用,亚**盐进一步还原成氧化亚氮或氮气, 滞留在小试管中。在45个供试菌株中,B88和B237菌株能够较好地降解培养基中的**盐和亚**盐,产气早,速度快,3~4d产气达到高峰,表明其反硝化作用较强。其他菌株虽然也都能将**盐还原成亚**盐,但不能进一步还原亚**盐,反硝化作用较弱。
2.菌株降解**盐特性的测定
在接种B88 、B237的培养基中,含氮量明显降低,表明B88 、 B237菌株具有较强的反硝化作用,能够有效降解培养基中的**盐。
3.生长温度测定
温度对B88、B237菌株的生长速度有显著影响,在好气条件下,用YB培养基振荡培养,菌株在20℃~40℃之间均能较好地生长,30℃左右为最适生长温度。
4.生长浓度的测定
反硝化细菌经过缓慢增长期和指数增长期后,由于营养的消耗和细菌之间的抑制作用, 菌体衰老、 消解,细菌浓度逐渐降低。B88菌株在最适培养条件下最高生长浓度为6.1×10个·mL-1,B237菌株在最适培养条件下最高生长浓度为1.54×10^8个· mL-1。
5.培养基及好气性测
由于反硝化细菌是在厌氧或微厌氧的条件下通过**盐诱导产生的**还原酶和亚**还原酶进行反硝化作用,因此,大多数研究人员在实验室培养反硝化细菌时,多在微厌氧条件下进行。但本试验结果表明,不管有无**盐的诱导,B88、B237菌株的快速生长是好气性的,生长受氧气供应量的限制,CO2含量(20%)的提高,对菌株的生长具有较强抑制作用; 在不同培养基上,其生长速度差别较大;在反硝化细菌培养基上生长速度反而慢 , 而在YB培养基中的 生长速度快。
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