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原代细胞培养所需的试剂

作者:上海一研生物科技有限公司 2018-09-07T09:47 (访问量:2935)

自从半个世纪前Henrietta Lacks的卵巢肿瘤成为HeLa细胞以来,细胞系已成为医学研究的必需品。如今,培养永生化的细胞已成为一种常规工作——只需要购买一些培养基,加入一些血清,放入培养瓶,让它们舒服地呆在CO2培养箱中。

然而,原代细胞和干细胞却是出了名的挑剔。它们的寿命有限,需要特殊的因素来培养,也容易受到其他因素的干扰,走向分化的不归路。在此,我们看看研究人员使用哪些培养基让这么挑剔的细胞快乐起来。
培养基的定义
多年来,许多经典的培养基已经形成,如MEM、DMEM和RPMI,它们在营养成分和盐的成分及数量上有所不同。生长因子及其他必需物质通常是以10%-20%的胎牛血清(FBS)的形式来满足的。它们让细胞系茁壮成长。“血清是复杂且不确定的,这样它就覆盖了培养基的许多不足,如营养物质有限,”美国菌种保藏中心(ATCC)的产品线业务经理Kevin Grady指出。
由于血清通常来自动物,这些动物的饮食并非标准化,生长环境不同,宰杀的时间也不同,故每一批的血清都可能存在细微或明显的差异。为了避免实验中出现相关的变化,研究人员往往从几家供应商中筛选血清,甚至从同一家供应商中筛选不同批号,并大量囤积同一批号。
在培养原代细胞时,挑战进一步升级。“它们有着非常特异的营养要求,而你一般不能使用经典的培养基+血清。你需要添加许多其他的因子,才能让原代细胞生长,”Grady解释道。血清本身有两个缺陷:一是缺乏维持生长所必需的因子,二是“血清中的未知成分可能导致原代细胞分化”。
“随着原代细胞培养的出现,人们开始尝试不使用血清,”Grady指出。“大部分的原代细胞培养基将是无血清的,至少是低血清的。”
一些研究人员开始选择血清替代物,它们可直接取代传统配方中的FBS。这些替代物可能包含蛋白质,如牛血清白蛋白,或可能无蛋白成分,但含有动物、植物或酵母水解物。或者它们是“化学成分限定、无动物组分的,”Essential Pharmaceutical的产品总监D. G. Ferneyhough谈道。“无论是哪一批次、哪一年,这些产品都是相同的,这意味着标准化。”
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