美国G-biosciences抗干扰蛋白测定试剂盒-分析方法-资讯-生物在线

G-BioSciences公司（美国）开发上市的一种高灵敏度显色反应蛋白测定试剂盒，克服了存在于蛋白溶液中实验室常用试剂干扰的缺点，不同蛋白检测误差极小。

本检测方法不受实验室常用试剂的影响，例如，还原剂、鳌合剂、去垢剂、氨、醣、离液剂、盐、药物、抗菌素、钴等。

检测分二步操作（见图1 NI蛋白检测法示意图）。检测蛋白浓度时，蛋白与碱性铜溶液混合；铜离子结合到多肽骨架后，检测未结合的铜离子。测定与蛋白侧链无关，使不同蛋白之间检测误差减少。显色密度与蛋白的量呈反比关系。

图1 NI蛋白检测法示意图。将Universal protein precipitation agent (UPPA)加入蛋白溶液以便迅速沉淀总蛋白，离心使蛋白固定在管壁，把存在上清液中的干扰性物质去除。

缓冲液成分

4　M urea, 1% SDS, 10 mM EDTA, 0.8% 2-Mercaptoethanol

6 M urea, 2 M thiourea, 4% CHAPS

6 M urea, 2 M thiourea, 4% Nonidet P-40

1% Sarcosyl, 0.8% 2- Mercaptoethanol, 4M guanidine thiocyanate, 10 mM EDTA

6 M urea, 2 M thiourea, 4% CHAPS, 2% ND SB201

6 M urea, 2 M thiourea, 4% CHAPS, 2% SB210

图2 NI蛋白检测在不同蛋白之间测定误差小。图示检测牛血清白蛋白、甲状腺球蛋白、碳酸酐酶、细胞色素C、牛免疫球蛋白G的不同蛋白之间监测误差。在0.5-50 微克范围内这些蛋白呈相同的颜色和曲线，差异比例1.01。

特征

- 在蛋白质0.5-50微克范围内呈线性反应

- 样品量小，仅需1-50微升

- 不受非蛋白化合物和试剂干扰

- 操作时间 ~30分钟

- 存放时间长，稳定期1年

应用

- 在蛋白纯化、电泳、细胞生物、分子生物等研究中测定蛋白

- 在蛋白样品中含有常见实验室试剂（如还原剂2-mercaptoethanol、DTT、EDTA、去垢剂、氨、Tris、醣等）时检测稳定。

- 在细胞分离成分、组织细胞匀浆、色谱分析纯化分离成分中测定蛋白浓度时检测稳定。

- 在稀释蛋白溶液时检测稳定。

参考文献

Karbarz M et al (2009) J Biol Chem 284 :414-425

Eismann T et al (2009) Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 298 :G266-G274

Xu Z et al (2009) J Cell Biol 186 : 343-353

Kalsotra A et al (2008) PNAS 105 :20333-20338

Bendezu F et al (2008) J Bacteriol 190 :1792-1811

货号	产品	规格
786-005	Non-interfering protein assay kit with albumin standard	500 assays

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