CIK细胞无血清培养基
★产品描述
免疫细胞无血清培养基BW12002是百恩维生物开发,可用于免疫细胞临床治疗研究的无血清培养基,生产过程符合cGMP的标准规范。可用于人类体外组织及细胞培养过程中的应用。
★技术手册
免疫细胞无血清培养基
★ 产品货号
BW12002
★ 产品规格
500ml,1000ml
★ 产品特点:
1、无血清培养基,无添加细胞因子
2、无异源动物成分,化学成分限定培养基
3、培养性能优越,支持高密度单核细胞培养
★ 产品应用
1、DC细胞、CIK细胞和NK细胞的长期增殖培养
2、PBL细胞和TIL细胞的长期增殖培养
3、单核细胞和巨噬细胞的长期增殖培养
4、T淋巴细胞的长期增殖培养
★ 操作步骤
培养过程:
以下过程作为常规免疫细胞培养的一般准则。如需在生物反应器或培养袋高密度培养,应优化条件来确定最佳的操作步骤。
T细胞培养:
1、准备新鲜的外周血单个核细胞(PBMC);或根据标准的外周血单个核细胞解冻程序,在37°C的水浴,快速解冻(<1分钟)冷冻小瓶的外周血单个核细胞
2、用生理盐水洗涤细胞,根据需要也可加入2-5%的热灭活的的人自体血浆。
3、计数细胞可以使用电子(即Coulter计数器,VI-细胞)或手动的方法(即血球计数仪)。
4、离心细胞,清除洗涤缓冲液。
5、培养初期,用含细胞因子(如IL-2)的培养基重悬PBMC;CD3 + T细胞密度保持在大约0.5-1×10 6/ mL。转移细胞到相应的细胞培养容器(培养袋、培养瓶)。随后可应用各种操作激活T细胞,包括添加刺激的抗体或抗原抗原呈递细胞。无论培养T细胞的规模大小,细胞均可被隔离,激活和扩大。
6、在37℃,5%CO 2的潮湿培养箱。在潮湿的气氛中,在37°C,5%CO2孵育培养容器。在对数生长期细胞,需要维持细胞所需的浓度。为了保持细胞指数生长期,当细胞密度超过1×10 6/ mL时,需要分离传代,维持细胞密度在0.5-1×10 6/ mL(例如,2×10 6个细胞/ mL以上,按1:4比例0.5x106细胞/ mL)。在静态平板培养中为了获得最佳的气体交换,建议培养基深度不超过1到1.2厘米。
单核细胞树突状细胞培养:
1、准备新鲜的外周血单个核细胞(PBMC)。
2、将外周血单个核细胞在铺在培养瓶中,用加入25 mL免疫细胞无血清培养基货号BW12002。
3、在37℃,5%CO 2的潮湿培养箱中孵育2〜3小时。
4、弃掉含非贴壁细胞的培养基。
5、用生理盐水洗涤贴壁细胞(主要是CD14 +单核细胞)三次。
6、往免疫细胞无血清培养基添加50至100 ng / mL的重组人IL-4和50 ng / mL的重组人GM-CSF。细胞密度应介于1~3x105细胞/ mL之间。研究者可视情况加入灭活的人自体血浆。
7、在37℃,5%CO 2的潮湿培养箱中连续孵育5天。培养3天左右换液。同时添加IL-4和GM-CSF。
8、 6天之后,细胞表现出典型的树突状细胞的形态和表面标记(细胞CD1a,CD80,CD86,HLA-DR)。
9、向培养基中添加1μg/ mL的LPS或者50μl/mL的TNF-α诱导的树突状细胞的成熟。
注:对于贴壁单核细胞也可以被磁珠分离。
★ 贮藏条件
★ 有效期
14个月
★ 运输
冰袋运输
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