描述：
新鲜/冷冻组织胞质胞核分离试剂盒从细胞和组织中分离细胞质和细胞核组分是一种常见的实验。细胞样品的组分分离相对简单直接，然而， 从组织样品中特别是冷冻组织中将胞质和胞核组分分离干净是很具挑战的。因为冷冻和反复冻融会引起组织细胞结构的改变，加之不适当的匀浆方式和效率低的提取缓冲液，使得交叉污染十分严重。目前大多数商业试剂盒设计可同时用于细胞和组织样品，但是忽略了两种类型样品之间的结构差异。因此，从新鲜/冷冻组织中分离胞质和胞核组分时，交叉污染问题无法避免(见下文参考文献 1 和 2)。这款新型的胞质和胞核分离试剂盒专用于组织样品的胞质胞核分离，试剂盒特有的缓冲液体系和独特的操作方法可以将交叉污染降到最低。整个操作可以在 30 分钟内完成。
应用：
可应用于 SDS-PAGE，immunoblottings，ELISA，IP，蛋白定位，凝胶迁移分析，2-D 等其他应用。

试剂盒组分：

1. 缓冲液A 25ml
2. 缓冲液B 10ml
3. 缓冲液D 1.5ml
4. 缓冲液N 1.5ml 5.1.5ml 离心管 40 个6.1.5ml 研磨杵 2 个7.蛋白质提取粉 2 克

运输：常温运输储存：4 度保存

重要产品信息：

1. 实验开始前将缓冲液A 和缓冲液B 冰上预冷。
2. 所有的离心步骤请在 4 度环境或 4 度冷冻离心机离心。
3. 使用前推荐将蛋白酶抑制剂加入分装的缓冲液A 中。
4. 研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂应在使用前加入到分装的缓冲液 A 和缓冲液 B  中。
5. 推荐使用BCA 法测定蛋白浓度。
6. 当室温低于 20 度时缓冲液D 中可能出现白色沉淀，使用前可将缓冲液 D 在 37 度水浴锅加热溶解沉淀。

操作方法：

1、 取 20-30mg 新鲜或冷冻组织样品，放入试剂盒提供的 1.5ml 离心管中，加入 250ul 缓冲液A 覆盖组织， 冰上孵育 5 分钟。使用提供的研磨杵轻轻的扭转研磨样品 1 分钟（40-60 次）。研磨杵可以重复使用， 用清水清洁后，用纸巾擦干即可。
2、 14000 X g，离心 5 分钟。转移 200μl 上清液(胞质组分)到新的自备的离心管中保存。(如果上清液不够澄清, 14000 X g，再离 5 分钟进一步澄清)。如上所述用研磨杵再次把沉淀进一步研磨 (研磨 60-100 次)。研磨杵放置于管中，加入 0.8 ml 缓冲液 A 到管中。再研磨几次，拿出研磨杵。用 1 毫升吸头上下吹打15-20 次混匀。在冰上孵育 5-8 分钟，让大的组织碎片通过重力作用沉到底部，将 0.7 ml 的上清液转移到一个新的试剂盒提供的 1.5 ml  管中(尽量避免管底大的组织碎片)。
3、 500xg，离心 2 min，弃去上清液。加入 0.5 ml 的缓冲液B，涡旋振荡 10-20 秒重悬沉淀。冰上孵育 5 分钟， 2000 X g 离心 2 分钟，完全去除上清液。
4、 沉淀是分离的细胞核，根据不同的下游应用有两种核蛋白提取方式可选：

A .变性核蛋白提取（提取出的核蛋白适用于 SDS-PAGE、Western blotting 等应用）

用 50μl  缓冲液 D  重悬沉淀(悬液可能粘稠，这是正常的)。称取 50-60  毫克的蛋白提取粉，加入沉淀(尽量避免接触管壁)。用研磨杵扭转研磨约 60-100 次。研磨杵仍置于离心管中，加入 50 -150ul 的缓冲液A 到管中，再研磨几次(使用缓冲液A 的多少取决于沉淀的大小。研磨杵可以重复使用，用清水清洁后，用纸巾擦干即可