无内毒素快速质粒超大量提取试剂盒Mega 6-核酸纯化-试剂-生物在线
Biomiga（中国）
无内毒素快速质粒超大量提取试剂盒Mega 6

无内毒素快速质粒超大量提取试剂盒Mega 6

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产品名称： 无内毒素快速质粒超大量提取试剂盒Mega 6

英文名称： EndoFree Plasmid ezFlow ezFilter Mega6 Kit

产品编号： PD1622-02

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产品产地： 美国圣地亚哥

品牌商标： biomiga

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使用范围： null

Biomiga（中国）
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试剂盒组分：
Catalog#
PD1622-02
Preps
10
DNA Unit
10
Filter Unit
10
Replacement Cup
20
Buffer A1
2×320 mL
Buffer B1
2×320 mL
Buffer N3
160 mL
Buffer KB
530 mL
Buffer RET
3×420 mL
RNase A(20 mg/mL)
2×32 mg（2×1.6 mL)
Endofree  Elution Buffer
270 mL
User Manual
1
 
保存条件：
 
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。
 
注意事项：
  1. 质粒拷贝数：纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同体积的Wash Buffer (70% 乙醇)和Endofree Elution Buffer.
  2. 转化菌: 若为-70℃甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
  3. 切勿直接取冻存在4℃的菌进行培养。
  4. 杯结合能力：6 mg
操作简明步骤：
  1. 取500 µL新鲜的菌液接种到 800-1,000 mL (勿超过 500 mL)的LB培养基（含适量抗生素），37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
  2. 加入60 mL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。
  3. 加入 60 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。 
  4. 加入15 ml Buffer N3, 立即反转几次至出现絮状白色沉淀。涡漩震荡10 秒。充分混匀后，溶液将会变的  颜色均一，如果此时溶液颜色不均一，均局部颜色过深，建议将溶液轻甩几次，以充分混合溶液，
  5. 将双层Filter unit与500 mL或1000 mL的灭菌瓶(Corning# 430518 or  430282 or equivalent) 连接，旋紧，再将此装置与真空负压装置连接。
  6. 先将步骤“5”中底部较澄清的裂解产物转移至双层Filter unit中，静置5分钟后打开真空装置，使负压由低到高，5分钟后增至最大（0.04 Mpa）
  7. 当大部分裂解液已被过滤时，关掉真空负压装置，等候1分种，拆卸装置，移去双层Filter unit。
  8. 再将DNA unit杯与一个新的灭菌的500 mL或1000 mL的灭菌螺口标准瓶连接，旋紧。并将过滤嘴与真空负压装置连接。在步骤“7”中收集到的裂解液中加入1倍体积的Buffer RET (如120 mLBuffer RET加入120 mL的上清液中), 60 mL100%乙醇，立即混合均匀，立即将一半倒入DNA unit杯中，开启负压装置，进行过滤吸附操作。
  9. 再将剩下一半倒入DNA unit杯中，当所有裂解液已过滤完，再维持真空1分钟后，关掉负压装置。
  10. 向DNA Unit杯中加入50 mL Buffer KB，最大负压（0.04Mpa）1分钟，使液体完全通过DNA Unit 杯。
  11. 在DNA Unit杯中加入50 mL 70%乙醇，最大负压（0.04 Mpa）1分钟，使乙醇完全通过DNA Unit杯。重复此操作步骤一次。
  12. 在DNA Unit杯中加入60 mL无水乙醇，最大负压1分钟，关掉负压装置，倒掉瓶子中的废液，将DNA Unit杯重新连接至标准瓶上，开启负压装置至最大负压，真空抽20分钟，以充分去除残留的乙醇。
  13. 关掉负压装置，静置一分钟，移去标准瓶，将DNA Unit 连接至一个新的50 mL的离心管中，并旋紧。
  14. 加入10 mL Endofree Elution Buffer到DNA Unit杯的膜上，室温放置2分钟，打开负压装置至最大（0.04 Mpa）洗脱DNA。此时会收集到3~5 mＬ洗脱液，这是1st 洗脱液。
  15. 关掉负压装置，将DNA Unit连接至一个新的50mL的离心管中，加入8 mL Endofree Elution Buffer到DNA Unit杯的膜上，室温静置2分钟，开启负压装置至最大（0.04 Mpa）洗脱DNA。此时会收集到约3-6 mL洗脱液，这是2nd洗脱液。