在生命科学研究和生物制药生产中，蛋白质的纯度和含量是评估样品质量与工艺稳定性的关键参数。含量（浓度）表示样品中目标蛋白的绝对量，而纯度则反映目标蛋白相对于杂质的比例。通常检测时，这两项指标依赖不同的技术手段，既增加了操作复杂性，也提升了误差风险。随着检测需求的提高，多技术整合正在成为实现蛋白质纯度与含量同步测定的理想方案。

一、同步测定的意义与关键挑战

单独测定蛋白纯度和含量往往需要两次独立实验，涉及不同样品处理和分析方法。这不仅增加了操作步骤，还可能因批次差异或样品消耗而导致结果偏差。同步测定的意义在于：

• 一次分析同时获得纯度与含量结果，节省时间和样品；
• 减少因操作步骤多而引发的误差，提高检测的准确性与重复性；
• 支持高通量分析和实时质量监控，尤其适合生物制药工艺开发及大规模筛选需求。

关键挑战则在于如何整合分离、定量及杂质分析功能，同时兼顾分析灵敏度、特异性和数据可溯性，适应复杂样品背景。

二、主要技术

1、紫外-可见分光光度法（UV-Vis）

基于蛋白在280 nm处的特征吸收，结合已知消光系数快速估算蛋白浓度。尽管操作简便，但其无法区分杂质成分，因为核酸及非目标蛋白也存在相似吸收特性。因此，UV-Vis适合作为初步含量估算，需结合其他手段进行纯度评估。

2、高效液相色谱（HPLC）

采用反相（RP-HPLC）、体积排阻（SEC-HPLC）或离子交换（IEX-HPLC）技术，可实现蛋白组分的高分辨分离。通过积分目标峰面积占比计算纯度，同时结合外标曲线或参考物质进行浓度定量。HPLC具备良好的分离效率和重现性，适合多样品批量分析与质量控制。

3、毛细管电泳（CE）

CE依靠蛋白分子量或电荷差异进行分离，分辨率高且样品用量低。结合紫外或荧光检测和内标校准，可同时评估纯度和定量含量，适合复杂样品及快速检测需求。

4、质谱（MS）与同位素内标技术

LC-MS/MS结合同位素标记肽段或全长蛋白内标，已成为蛋白含量绝对定量的主流方法。其高灵敏度和特异性，可在复杂样品中精准测定目标蛋白浓度，同时基于质谱峰图中的杂质信息进行纯度分析。若与HPLC分离结合，可在高复杂度基质中实现高通量检测。

三、多技术整合策略

为同时实现蛋白质纯度与含量测定，需整合具备分离能力、定量准确性及杂质识别能力的多种技术，并辅以自动化与智能数据分析：

• 色谱-质谱联用：HPLC实现样品分离，减少复杂背景干扰；LC-MS/MS提供高灵敏度绝对定量及杂质峰分析。两者结合兼具分离与定量优势。
• 自动化与标准化流程：通过自动化系统控制样品制备、纯化和检测，减少人为误差，提高结果稳定性。关键参数（如流速、梯度、柱温）标准化，确保批次间一致。
• 智能数据处理与报告生成：利用算法与专业软件，自动识别目标峰、计算纯度与含量，并生成可追溯报告，支持高通量应用和质量控制。

四、方法选择与应用建议

• 样品背景简单：采用HPLC结合外标曲线定量，可实现同步纯度与含量检测，适合生产质量控制场景。
• 复杂样品（如血清、细胞裂解液）：推荐HPLC与质谱联用方案，兼顾分离效果与高灵敏度定量，确保结果可靠。
• 样品量少或需快速检测：毛细管电泳具有高分辨率和低样品消耗优势，适合筛选或微量样品分析。
• 快速含量估算：UV-Vis可作为预估手段，但需后续采用高分辨方法确认。

蛋白质纯度与含量的同步测定不仅提高了检测效率，更保障了数据的准确性与可重复性。通过色谱、毛细管电泳和质谱等技术的合理组合，辅以自动化系统与智能数据解析，可在单次分析中准确获得两项核心指标，适应生命科学与生物制药对高效、精准检测的需求。未来，蛋白质分析技术将持续向集成化、自动化和高通量方向发展，为科研和产业提供坚实的质量支撑。百泰派克生物科技致力于提供可靠的蛋白质分析整体解决方案，助力生命科学研究与产业转化高质量发展。如需了解更多HPLC测定蛋白纯度详情，欢迎联系我们获取专业支持与定制服务！

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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