黑腹果蝇转基因（P因子随机插入转基因 和attP-PhiC31整合酶定点插入 ）
产品名称： 黑腹果蝇转基因（P因子随机插入转基因 和attP-PhiC31整合酶定点插入 ）
英文名称： piggybac and attP-PhiC31
产品编号： ID
产品价格： 询价
产品产地： null
品牌商标： null
更新时间： 2025-08-15T14:00:29
使用范围： null
启东芳景生物科技有限公司
- 联系人 :
- 地址 : 启东市经济开发区林洋路500号
- 邮编 :
- 所在区域 : 江苏省
- 电话 : 181****0069 点击查看
- 传真 : 点击查看
- 邮箱 : fanjinhua@fungene.tech
P因子随机插入转基因
P因子转基因技术最早由Rubin和Spradling于1982年开发出来，他们将带有正常rosy基因的P因子载体，注射到rosy突变体果蝇（眼色为棕色）的胚胎后，能够从后代中筛选到rosy基因功能恢复的果蝇（眼色正常），证明正常rosy基因被整合到了突变体果蝇的基因组上。自此，P因子转基因技术成为重要的研究工具。P因子转基因起初主要应用于构建果蝇突变体，后来生物学家根据需要又对P因子进行了修饰和改造，进一步开发出表型resuce、enhancer trapping、gene trapping、RNAi、辅助FLP/FRT系统、gene targeting等多种应用，P因子转基因技术已成为果蝇基因研究不可或缺的重要技术。
P因子是在果蝇基因组上发现的一类转座子，分自主（autonomous）和非自主（non-autonomous）两种类型。自主P因子自身能够编码转座酶（transposase），介导P因子的转座；非自主P因子则依赖外源的转座酶来进行转座。野生型的自主P因子长2.9kb，5‘和3’末端含31bp的倒置重复序列，中间编码含4个ORF的转座酶基因，重复序列和转座酶是发生转座必不可少的元件。
P因子是在果蝇基因组上发现的一类转座子，分自主（autonomous）和非自主（non-autonomous）两种类型。自主P因子自身能够编码转座酶（transposase），介导P因子的转座；非自主P因子则依赖外源的转座酶来进行转座。野生型的自主P因子长2.9kb，5‘和3’末端含31bp的倒置重复序列，中间编码含4个ORF的转座酶基因，重复序列和转座酶是发生转座必不可少的元件。
一般的P因子转基因，都是通过向胚胎注射带有外源目的片段的非自主型P因子，这就需要外源提供转座酶。外源转座酶有通常两种提供形式：通过共注射转座酶辅助质粒（Δ2-3 transposase helper plasmid）（如图2），或者胚胎自身
表达转座酶。我们可以根据客户的选择，共注射helper plasmid或者注射Δ2-3 strain（BDSC# 1610，BDSC# 2078）。
表达转座酶。我们可以根据客户的选择，共注射helper plasmid或者注射Δ2-3 strain（BDSC# 1610，BDSC# 2078）。
| 转座酶随机插入 | ||
| 实验步骤 | 内容 | 周期(周) |
| 注射样品制备 | 1.Donor载体构建：无缝克隆连接 载体：包含piggybac转座子 + miniWhite marker 片段：包括质粒亚克隆，基因组DNA克隆，cDNA克隆等方式 2.Donor质粒去内毒素提取 |
1~4 |
| 显微注射 | 1.注射品系：w1118(或客户指定品系) 2.注射样品：donor质粒 + piggbac转座酶helper质粒 3.注射胚胎数量：500-600个 |
2 |
| 杂交和筛选 | 1.P0果蝇与平衡子杂交 2.筛选F1阳性果蝇(红眼) |
2 |
| 分子鉴定 | 1.插入目的序列鉴定 2.插入基因组位置鉴定 |
0 |
| 构建稳定品系 | 1.F1阳性果蝇杂交双染色体平衡子，确定插入染色体 2.构建稳定/纯合品系 |
6~10 |
| 合计 | 11~18 |
PhiC31定点插入转基因
果蝇中的PhiC31整合系统由3部分构成：(1) PhiC31整合酶；(2) attP果蝇品系；(3) 带有attB序列的注射质粒。PhiC31整合酶可通过注射外源PhiC31整合酶mRNA来提供，或者通过转基因将整合酶基因整合到果蝇基因组上，从而让胚胎自身表达提供整合酶。attP果蝇品系是通过转座子转基因技术（比如P因子， piggyBac， Mariner转座子），构建的带有attP位点的果蝇品系。attB质粒除了含attB位点，还被克隆上去了需要整合到基因组上的目的片段。这样，在PhiC31整合酶的催化下，注射质粒上的attB位点与基因组上的attP位点之间发生重组，从而将质粒上的序列完全整合到基因组上，并在序列两端形成新的杂合位点attL和attR，但attL与attR不能介导新的重组，因此PhiC31介导的转基因过程是不可逆的。
多样化的attP果蝇品系：芳景提供多种有效的attP果蝇品系，涵盖X染色体和2号、3号染色体上的多个位点，便于进行基因重组。
◉推荐常用attP品系：attP40(II,25C6)，attP2(III,68A4)，效率高并且经过实验验证，被证明不影响插入位点附近的基因功能，且插入序列表型稳定。
◉推荐重组用attP品系：attP5(II,50F1)，VK00005(III,75A10)，适用于分别同attP40和attP2的定点插入品系进行重组构建，从而进行更复杂的课题研究。
广泛的科研应用场景：◉外源序列转入：可实现从简单到复杂序列的转入，一般推荐载体总长度小于15kb。
◉内、外源基因过表达：提供5~20×UAS，实现不同程度的基因过表达；提供多种泛表达和组织特异性表达的GAL4品系。
◉RNA干扰：单个shRNA针对单基因干扰研究多个shRNA串联，对多个基因进行共同干扰研究
◉基因调控研究定制化服务：除了GAL4-UAS系统，芳景生物也拥有其他多种基因调控研究的经验和方案可供选择，如：
- 生殖系统表达：UASp-K10；
- 二元调控系统备选方案：lexA-lexAop，QF-QUAS-QS；
- 诱导启动或抑制表达：GeneSwitch，GAL80；
- Split-GAL4：p65AD，GAL4DBD；
- 增强子表达模式研究：GMR-FlyLight，VT系列等。
如果客户希望将目的片段整合到特定的attP品系，可以将果蝇寄给我们进行扩增然后进行注射。另外，我们免费提供balancer杂交及鉴定服务（我们有FM7a，Bc/Cyo，TM3/TM6b等balancer品系），如果客户需要与指定的品系进行杂交，可提前将果蝇寄给我们进行扩增。
| attP-PhiC31定点插入 | ||
| 实验步骤 | 内容 | 周期(周) |
| 注射样品制备 | 1.Donor载体构建：无缝克隆连接 载体：包含attB位点 + miniWhite marker 片段：包括质粒亚克隆，基因组DNA克隆，cDNA克隆等方式 2.Donor质粒去内毒素提取 |
1~4 |
| 显微注射 | 1.注射品系：attP果蝇品系(PhiC31内源表达) 2号染色体：attP40、attP5 3号染色体：attP2、VK00005 2.注射样品：donor质粒 3.注射胚胎数量：200-300个 |
2 |
| 杂交和筛选 | 1.P0果蝇与平衡子杂交 2.筛选F1阳性果蝇(红眼) |
2 |
| 分子鉴定 | 1.插入目的序列鉴定 2.插入基因组位置鉴定【1】 |
0 |
| 构建稳定品系 | 1.F1阳性果蝇杂交平衡子 2.构建稳定/纯合品系 |
4~6 |
| 合计 | 9~14 |