离心法质粒大量提取试剂盒(25preps)
产品名称： 离心法质粒大量提取试剂盒(25preps)
英文名称： Plasmid maxi kit
产品编号： PD1511-02
产品价格： 0
产品产地： 美国圣地亚哥
品牌商标： Biomiga
更新时间： null
使用范围： null
Biomiga（中国）
- 联系人 :
- 地址 : 上海市闵行区吴河路328号A栋2楼
- 邮编 : 201109
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 400-826-1968 点击查看
- 传真 : 点击查看
- 邮箱 : tech@biomiga.com.cn
试剂盒组分：
|
Catalog# |
PD1511-02 |
|
Preps |
25 |
|
ezBindTM Columns |
25 |
|
Buffer A1 |
270 mL |
|
Buffer B1 |
270 mL |
|
Buffer C1 |
330 mL |
|
Buffer KB |
270 mL |
|
RNase A(20 mg/mL) |
27 mg(1.35 µL) |
|
Elution Buffer |
60 mL |
|
User Manual |
1 |
保存条件：
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。
注意事项：
- 质粒拷贝数：纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同体积的Wash Buffer (70% 乙醇)和Elution Buffer。.
- 转化菌：若为-70oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
- 柱结合能力：1 mg
操作简明步骤：
- 取100 µL新鲜的菌液接种到150-200 mL (勿超过 200 mL)的LB培养基（含适量抗生素），37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
- 加入10 mL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。
- 加入 10 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
- 加入12 mL Buffer C1, 立即反转5次，用手用力摇晃3-5次充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
- 将离心管转至高速离心机，在室温下14,000 x g 离心10分钟（若上清中有白色沉淀，可再次离心，）。
- 小心吸取离心后的上清液至15 mL管中（避免吸起沉淀），加入12 mL 100% 乙醇，立即摇匀，需马上离心过DNA柱。
- 立即转移20 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中，室温下> 2,500 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复此步直至所有的溶液通过DNA柱。
- 可选: 向DNA柱中加入 10 mL Buffer KB, 室温下> 2,500 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
- 向离心柱中加入10 mL 70% 乙醇，室温下>2,500 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“9”。
- 将离心柱放回高速离心机中，室温下>2,500 x g 开盖离心10分钟，以彻底去除残留的乙醇。
- 将离心柱转至一个新的50 mL离心管中，向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL灭菌ddH2O（pH在7.0-8.5之间）或Elution Buffer，室温放置1分钟，5,000 x g离心5分钟，以洗脱质粒DNA。若想提高得率，将50 mL离心管中的洗脱液再加到柱的中间，5,000 x g离心5分钟以洗脱质粒DNA。
操作流程：
