磁珠法石蜡包埋组织DNA提取试剂盒

中文名称：磁珠法石蜡包埋组织DNA提取试剂盒
英文名称：FFPE DNA Extraction Kit with Magbead
产品规格：96次
本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的从石蜡包埋组织中提取DNA的方法。实验过程中可采取无毒的去蜡剂去除石蜡，降低实验过程中对实验者的危害。组织裂解后，DNA结合于硅基包被磁珠表面。漂洗后，高纯度的DNA洗脱于EB或去离子水中。DNA的得率、片段大小与样品类型，及储存条件、时间有很大关系。提取得到的DNA可用于定量PCR、二代测序建库等下游检测。

试剂盒组成：

保存条件：室温（15-30℃）。
自备试剂：无水乙醇、异丙醇

实验前准备及重要注意事项：
1．向25 mg Proteinase K粉末中加入1.25 ml Proteinase K Storage Buffer，涡旋震荡混匀使其充分溶解，之后-20℃保存备用。
2．第一次实验前按照试剂瓶标签上的说明向Buffer GW1和Buffer GW2中加入指定用量的无水乙醇。
3．Magbeads PN严禁冰冻和高速离心，否则可能会对Magbeads PN造成不可逆的损害。

操作方法：

石蜡去除（方案一二甲苯法）
1．用刀片去除组织周围多余石蜡，之后切取5-8片5-10μm的石蜡卷放入1.5 ml离心管中。
2．向离心管中加入1 ml二甲苯，涡旋震荡10秒使石蜡充分溶解。
3．16,000×g离心2分钟，之后吸弃溶液，小心沉淀丢失。
4．向离心管中加入1 ml无水乙醇，涡旋震荡10秒。
5．16,000×g离心2分钟，之后吸弃溶液，小心沉淀丢失。
6．打开管盖，室温放置10分钟使乙醇充分挥发。

石蜡去除（方案二无毒脱蜡法）
1．用刀片去除组织周围多余石蜡，之后切取5-8片5-10μm的石蜡卷放入1.5 ml离心管中。
2．向离心管中加入400μlBuffer DS，56℃孵育2分钟后立即涡旋震荡10秒钟使石蜡充分溶解，之后继续孵育2分钟。
3．离心管孵育后立即16,000×g离心2分钟，之后吸弃溶液，小心沉淀丢失。
4．向离心管中加入1 ml无水乙醇，涡旋震荡10秒钟后56℃孵育2分钟。
5．16,000×g离心2分钟，之后吸弃溶液，小心沉淀丢失。
6．重复步骤4-5。
7．打开管盖，室温放置10分钟使乙醇充分挥发。

提取步骤：
1．向离心管中加入20 μl Proteinase K和300 μl Buffer WL，之后将离心管固定于56℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡裂解1小时，直至样品完全溶解。
2．将离心管放于90℃的恒温混匀仪上孵育1小时。
3．将离心管从恒温混匀仪上取下，平衡至室温后短暂离心，之后加入200 μl Buffer ML并涡旋震荡混匀。
4．向离心管中加入300 μl异丙醇与10 μl磁珠后涡旋震荡混匀5秒钟，之后将离心管固定于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡结合5分钟。
5．将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。
6．向离心管中加入750 μl Buffer GW1（使用前请检查是否已加入无水乙醇），涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡结合2分钟。
7．将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。
8．重复步骤6-7。
9．向离心管中加入750 μl Buffer GW2（使用前请检查是否已加入无水乙醇），涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上震荡结合2分钟。
10．将离心管固定于磁力架上静置1分钟，之后弃去溶液。
11．重复步骤9-10。
12．离心管短暂离心后，将其重新固定于磁力架上用移液器去除管底溶液，之后室温放置5-10分钟使乙醇充分挥发。
13．向离心管中加入50-200 μl Buffer EB后涡旋震荡使磁珠充分悬浮于洗脱液中，之后将离心管固定于56℃、1600rpm的恒温混匀上震荡洗脱10分钟。
14．将离心管固定于磁力架上静置2分钟，之后将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！