PCR Mix


货号           规格                价格

P2011    1 ml（40次，50 μl体系/次）        120


P2012    1 ml×5（200次，50 μl体系/次        500



产品组分

P2011

2×PCR Mix        1ml    1支

超纯水           1ml    1支

P2012

2×PCR  Mix      1ml    1支×5

超纯水          1ml    1支×5

注： 本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。



保存条件

  -20℃保存2年。

请勿保存于-70℃，防止反复冻融导致酶活降低。



产品说明

    PCR Mix是2×浓缩的PCR扩增预混和溶液，含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分（模板与引物除外）。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染（加样次数减少）同时，由于体系内含有增强剂，能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3’-dA突出端。

Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶，分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb（简单模板）。延伸速度为0.9-1.2 kb/ min（70-75 ℃）。该酶具有5’→3’聚合酶活性，无3’→5’外切酶活性。


产品特点

•使用方便：仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。


•快速、高效：减少加样步骤，节约时间。


•可重复：降低污染和加样错误风险



产品用途

•高通量PCR检测。


•高重复性PCR检测。


•制备TA克隆用的PCR产物。




活性定义

    一个活性单位（U）指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。



质量控制

  相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；室温放置

一周，扩增活性无明显改变。



2×PCR Mix(前名Taq Mix）的组分

  100 mM KCl

  20 mM Tris-Cl

  3 mM MgCl2

  0.4 mM dNTP混合物

  0.1 U/μlTaq DNA聚合酶

  溴酚蓝等



应用举例

注：以下反应举例为50 μl标准PCR体系，仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。（Taq Mix即PCR Mix）



以λDNA为模板，扩增1kb片段。

λ DNA（2.5 ng/μl）                 1μl

Primer 1（10μM ）                  2μl

Primer 2（10μM）                   2μl

2×PCR Mix                             25μl

dd H2O                        补足至50μl



反应条件

95℃             3 min

95℃            30 sec

55~68℃       30 sec    30 Cycles

72℃           1~2 min

72℃             10min





备注：

1  建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。

2  模板DNA推荐用量（50 μl PCR反应体系）

    人类基因组DNA       0.1 μg ---1 μg

    λDNA                 0.5 ng---5 ng

    质粒DNA             0.1 ng-10 ng

    大肠杆菌DNA         10 ng-100 ng



Q&A

问：PCR Mix的反应体系与普通Taq DNA聚合酶的反应体系有何不同？

答：PCR Mix的反应体系中除Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、Mg2+等常规组分外，还包含适当比例的PCR Enhancer与稳定剂。而且，反应体系中的离子种类与

浓度也有所区别。



问：为什么PCR Mix的灵敏度与扩增效率会高于普通Taq DNA聚合酶？

答：这是由于东盛对PCR Mix反应缓冲液中的成分与浓度进行了优化。我们在TaqMix反应缓冲液中添加了适当比例的PCR Enhancer，提高了聚合酶的热稳定性，

显著降低DNA二级结构对于PCR扩增的影响。同时，对PCR Mix反应缓冲液中的离子浓度与比例进行优化，使得聚合酶处于最适活性状态，从而获得了最佳的扩

增效率。



问：为什么PCR Mix的重复性更好？

答：这是由于PCR Mix是规模化工业生产，PCR体系组分的浓度与比例一致性好，且减少多种溶液被PCR模板污染的可能性，以及在加样过程中人为造成的误

差，大大提高了实验的重复性，特别适合高通量与高重复性PCR检测。

问：PCR Mix的扩增产物能否直接进行TA克隆？

答：可以直接进行TA克隆。