亲和纯化 - 质谱联用（Affinity Purification-Mass Spectrometry, AP-MS）是一种结合了特异性蛋白质分离技术与高灵敏度分子检测技术的综合方法，广泛应用于蛋白质组学研究中。这一技术的基本思想是通过亲和纯化从复杂生物样品中选择性地分离目标蛋白质及其相关分子，然后利用质谱分析对分离的分子进行鉴定和定量。亲和纯化依赖于目标蛋白与其结合分子之间的高特异性相互作用，例如抗体与抗原、配体与受体、或生物素与链霉亲和素，这种高效的分离手段确保了目标蛋白及其相互作用分子的富集；而质谱分析通过测量分子的质量和丰度信息，为研究者提供了目标蛋白复合物的组成及其相互作用网络的全景视图。亲和纯化 - 质谱联用不仅是研究蛋白质相互作用的有力工具，更是一种解析生物分子复杂动态网络的通用技术。在基础生命科学研究中，该技术被用来探究蛋白质复合物的功能组成、信号通路的动态变化，以及翻译后修饰的影响；在应用研究中，它为新型药物靶点的发现、疾病相关分子的鉴定及功能验证提供了有力支持。与传统蛋白质研究方法（如共聚焦显微镜或蛋白质免疫印迹）相比，亲和纯化 - 质谱联用的优势在于其高灵敏度、高通量和广覆盖性，能够捕捉细胞环境中的低丰度蛋白及其伴随分子，进而揭示分子调控的潜在机制。近年来，该技术的进步使得我们能够以更高的精确度解析动态的蛋白质相互作用网络，从而为揭示细胞活动的机制和疾病的病理过程提供了前所未有的洞察。

一、亲和纯化 - 质谱联用的技术原理与关键步骤

亲和纯化 - 质谱联用的成功依赖于两个关键技术环节：亲和纯化和质谱分析。

1、亲和纯化

亲和纯化是亲和纯化 - 质谱联用的第一步，其核心在于通过目标蛋白与特定结合物之间的高特异性相互作用，从复杂的生物样品中富集目标蛋白及其相关分子。该步骤通常包括以下几种方法：

（1）抗体依赖的亲和纯化：使用特异性抗体识别目标蛋白或蛋白标签（如FLAG、HA、His标签）进行亲和纯化。

（2）配体-受体亲和纯化：使用天然配体或合成分子捕获目标蛋白，例如利用DNA、RNA或小分子化合物结合特定蛋白质。

（3）标记辅助亲和纯化：为目标蛋白引入生物素标签，利用链霉亲和素的高亲和性实现分离。

在亲和纯化过程中，为减少背景噪声，需优化洗涤条件，去除非特异性结合的分子，并确保目标蛋白复合物的完整性。

2、质谱分析

纯化后的蛋白质复合物通过酶解（通常为胰蛋白酶）转化为肽段，然后通过质谱分析实现高灵敏度检测。常用的质谱方法包括：

（1）液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）：通过液相色谱对肽段进行分离，再结合串联质谱（MS/MS）对其进行鉴定。

（2）定量质谱：包括标记定量（如SILAC、TMT/iTRAQ）和无标定量（如基于光谱计数或峰面积的定量），实现对蛋白质丰度的比较分析。

质谱结果通常经过专业的生物信息学工具进行解析，如数据库搜索（Mascot、Sequest）和统计分析，从而获得蛋白质组信息。

二、应用与研究价值

亲和纯化 - 质谱联用技术在多个研究领域具有广泛应用，以下是其主要方向：

1、蛋白质相互作用网络解析

亲和纯化 - 质谱联用能够揭示目标蛋白与其他蛋白质之间的物理或功能相互作用，从而构建相互作用网络。这对理解蛋白质在细胞信号传导、代谢调控和病理过程中的作用尤为重要。例如，通过这项技术，研究者发现了许多疾病相关的蛋白质相互作用网络，为靶向治疗提供了新思路。

2、蛋白质复合物组成分析

细胞中许多生物学功能是由蛋白质复合物协同完成的，该技术不仅能够富集目标蛋白，还能鉴定其复合物的具体组成，为理解分子机制提供了重要线索。

3、翻译后修饰研究

结合特异性修饰抗体（如磷酸化抗体），亲和纯化 - 质谱联用可用于研究蛋白质翻译后修饰的动态变化及其对蛋白质功能的调控。

4、药物靶点筛选与验证

在药物研发中，亲和纯化 - 质谱联用技术被用来确认药物的靶点及其作用机制，同时筛选药物干预后蛋白质相互作用的变化。

三、注意事项与挑战

亲和纯化 - 质谱联用的结果准确性依赖于严格的实验设计与操作。以下是常见的挑战与注意事项：

1、非特异性结合

在亲和纯化过程中，非目标蛋白质可能通过非特异性结合进入复合物中，需要优化实验条件以减少背景噪声。

2、样品损失与降解

样品制备时需加入蛋白酶抑制剂，避免蛋白质降解。同时，应使用温和的裂解条件保护蛋白质复合物的完整性。

3、质谱灵敏度与覆盖率

对低丰度蛋白的检测可能受到限制，需结合高灵敏度质谱仪或进一步优化样品分离策略。

百泰派克生物科技利用先进平台和技术为客户提供从实验设计到数据分析的全流程服务，我们的技术团队严控实验过程，确保高质量数据输出，助力您的科研探索，为生命科学研究和技术开发创造更多可能性。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

>>点击了解更多优质服务项目