RT-PCR技术服务
产品名称： RT-PCR技术服务
英文名称： Reverse transcriptase PCR
产品编号：
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更新时间： null
使用范围： null
- 联系人 :
- 地址 : 北京市海淀区复兴路40号铁建医院
- 邮编 : 100039
- 所在区域 : 北京
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反转录PCR（Reverse transcriptase PCR,RT-PCR）是一种从RNA扩增cDNA拷贝的方法。RT-PCR对于获得与克隆mRNA的5’、3’末端序列和从非常少量的mRNA样品构建大容量的cDNA文库方面都是极为灵敏与通用的方法。此外，RT-PCR还易于鉴定已转录序列是否发生突变及呈现多态性，还可用于测定基因表达的强度。我公司采用二步RT-PCR法，可满足客户不同的实验要求。 RNA模板的制备需另收费（见RNA提取服务）以上为1个目的基因的报价。进行相对定量分析时，同一材料的多个目的基因的价格=1个目的基因价格×目的基因个数。 提供结果
样品要求：提供的样品要新鲜并尽可能多，不推荐提供RNA样品，或者提供cDNA，并尽可能详细的提供背景资料（基因序列、Genebank accession number扩增产物的用途等）。
基本步骤
● 模板制备：见RNA提取技术服务。
● 引物设计
客户提供上、下游引物，或者我公司提供免费的引物设计及合成（包括RT-PCR半定量检测中的内参引物）。
● 反转录
（1）Microtube管中配制下列模板RNA/引物混合液，全量<15 μl。
（2）70℃保温5分钟后迅速在冰上急冷2分钟以上。
试剂名称
使用量
模板RNA
2μg
Oligo(dT)12-18 Primer（50μM）
2.5μl
（3）离心数秒钟使模板RNA/引物的变性溶液聚集于Microtube管底部。
（4）在上述Microtube管中配制下列反转录反应液。
42℃保温1小时。
试剂名称
使用量
上述模板RNA/引物变性溶液
5×M-MLV Buffer
5μl
dNTP Mixture（各10 mM）
1.25μl
RNase Inhibitor（40 U/μl ）
25U
M-MLV（200 U/μl ）
200U
RNase free dH2O
up to 25μl
（5）70℃保温15分钟后冰上冷却，得到cDNA溶液。
若需要表达，参考基因表达服务。若需要进行RT-PCR半定量分析，接着以下的操作。
● RT-PCR半定量分析
PCR扩增目的基因及看家基因，产物经过琼脂糖凝胶电泳后进行灰度扫描分析。
价格.实验周期
样本数
收费标准
实验周期
8个以下（含8个）
120元/样品
8个工作日
50个以下（含50个）
100元/样品
15个工作日
50个以上
询价
20个工作日
完整的实验操作步骤、电泳图、定量分析结果等。