修饰技术-磷酸化TMT标记定量
磷酸化是生物体内重要的蛋白质修饰种类,与酶活性,信号传导等多种极为重要的生物过程相关。因为含量很低,磷酸化信号大规模分析前一般需要先将其富集出来
荧光差异凝胶电泳
荧光差异凝胶电泳技术基本实验线路是电泳前以Cy2、Cy3 和Cy5三种荧光染料分别标记蛋白质样品(其中包括一个蛋白质内标)。然后将标记好的蛋白质样品混合,在同一块胶上进行双向电泳。电泳结果分别用3种不同的激发波长得到不同颜色的荧光信号,根据这些信号的比例来判定样品之间蛋白质的差异,并且专用软件可全自动根据每个蛋白点的内标对其表达量进行校准,保证所检测到的蛋白丰度变化是真实的。